卵巢浆液性癌中Lewis y 抗原表达与耐药的
相关性研究#
胡珍华，刘川，高嵩，高健，刘水策，刘大我，李贝贝，张淑兰，林蓓***
基金项目：国家自然科学基金资助项目(项目编号：30170980, 30571958, 30872757, 81072118)；辽宁省自然
基金资助项目（项目编号：20052107）；教育部博士点基金资助项目（项目编号：20070159023）；辽宁省
教育厅重点实验室项目（2008S247）；盛京自由研究者计划（200807）；沈阳市科委基金资助项目(项目编
号:F10-14-9-9-52)
作者简介：胡珍华，（1985-），女，博士生，妇科肿瘤的基础与临床研究。
通信联系人：林蓓，（1962-），女，主任医师，博士生导师，妇科肿瘤的基础与临床研究. E-mail:
linbei88@hosmail.com
5 （中国医科大学附属盛京医院妇产科，沈阳 110004）
摘要：目的 探讨Lewis y 抗原与卵巢浆液性癌耐药的关系。方法 应用免疫组化法检测卵
巢浆液性乳头状腺癌54 例（其中耐药组24 例，敏感组30 例）中Lewis y 抗原的表达情况，
并分析其与卵巢癌耐药的关系。结果 卵巢浆液性乳头状腺癌耐药组Lewis y 抗原的阳性表
达率和表达强度分别为91.67%、0.2426±0.06293 均明显高于敏感组60%、0.2113±
10 0.03896（0.005〈P〈0.01、P=0.028）。结论 Lewis y 抗原与卵巢浆液性乳头状腺癌化疗
耐药相关。
关键词：卵巢浆乳癌；耐药；Lewis y 抗原；免疫组织化学
 0 引言
35 卵巢上皮性癌（卵巢癌）发病隐匿，多数患者确诊时已属于晚期，其治疗方法主要是肿
瘤细胞减灭术与以卡铂和紫杉醇为基础的联合化疗，但固有耐药和获得耐药的发生是制约疗
效的主要因素，据报道75%~80%的卵巢癌初始对化疗有反效，余者则表现为原发耐药，而
最终所有化疗患者至少80%出现耐药[1]。因此卵巢癌耐药原因的研究对改善患者治疗疗效、
提高患者生存率具有重要意义。肿瘤细胞表面结构异常的糖链可被机体的免疫系统视为非己
 40 外来物，从而成为肿瘤相关糖抗原(TACA)，近年来TACA 与肿瘤耐药之间的关系引起了人
们的关注，Lewis y 抗原既是其中一种，近年来受到研究者的广泛重视。
Lewis y 抗原是双岩藻糖基化的寡糖，属于II 型血型相关抗原。研究发现75%以上的上
皮性卵巢癌出现Lewis y 抗原不同程度的高表达，且表达增高的患者预后不良[2,3,4]。Cordel
等2000 年报道α1,2 岩藻糖转移酶和II 型血型相关H 抗原与肿瘤细胞对5-氟尿嘧啶耐药的
45 产生有关[5]。本课题组前期研究发现卵巢癌细胞系RMG-1 转染α1,2-岩藻糖转移酶基因后，
细胞表面Lewis y 抗原含量增加的同时，细胞的增殖、黏附等恶性生物学行为增强[6]，对5-FU、
卡铂、紫杉醇等多种化疗药物的耐药性明显增强，凋亡率也明显下降[7,8]，Lewis y 抗体可以
部分抑制上述变化[9]。本研究通过比较卵巢癌中发病率最高的浆液性乳头状腺癌化疗耐药与
化疗敏感患者组织中Lewis y 抗原的表达，进一步探讨其与卵巢癌化疗耐药的关系及其临床
50 意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源
选择中国医科大学附属盛京医院妇产科2005 年~2009 年期间，经手术及病理证实原发
卵巢浆液性乳头状腺癌的存档蜡块作为研究对象54 例，患者临床资料及化疗随访（随访时
55 间一年以上）资料完整。患者接受卵巢癌肿瘤细胞减灭术，行子宫双附件+盆腔淋巴结清除
+阑尾切除+大网切除术，术后用紫素+卡铂（TC 方案）正规化疗6~8 个疗程，化疗结束后
随访1 年以上，术前均未接受过放化疗。卵巢肿瘤分级按WHO2009 制定的标准： I 级7
例、II 级24 例、III 级23 例；临床分期按2009 年FIGO 制定标准;I 期7 例、II 期5 例、III
期42 例。
60 1.2 分组及特点
根据NCCN 指南：将患者分为卵巢癌化疗耐药组（耐药组）、化疗敏感组（敏感组），
分别满足以下条件。耐药组：初次采用以卡铂+紫杉醇为基础的化疗，并获得临床缓解，但
是在化疗后期及完成化疗后6 月内出现复发；部分敏感组：在完成化疗后6～12 月内复发；
12 个月以上为完全敏感。卵巢癌复发的主要临床特征有：1）CA125 持续升高；2）妇科检
65 查发现包块；3）影响学检查发现肿块；4）出现腹水；5）不明原因的肠梗阻等。本文所收
集的54 例标本以此为标准分组：化疗耐药组24 例，完全敏感组30 例，患者平均年龄54.17
岁(24 岁～78 岁)。耐药组患者年龄34～76 岁，中位数年龄55 岁；敏感组患者年龄24～78
岁，中位数年龄52 岁，两组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
1.3 主要试剂
70 鼠抗人Lewis y 单克隆抗体（clone A70-C/C8）购于英国Abcam 公司，免疫组织化学试
剂盒购自武汉博士德公司，其他试剂及仪器由本院中心实验室提供。
1.4 方法
免疫组织化学方法：各组卵巢组织均采用5 μm 连续切片，采用免疫组化链霉菌抗生物
素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法检测Lewis y 的表达。每批实验中均按比例选择耐药、敏
75 感组切片，每批均设阳性和阴性对照片，Lewis y 抗原阳性对照使用胃癌组织，阴性对照是
由磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗。鼠抗人Lewis y 抗体工作浓度为1:160，染色方法按SP
 试剂盒说明书进行。
1.5 结果判定标准
免疫组化染色结果：以细胞膜、细胞浆有棕黄色颗粒着色为阳性。按着色强度为不着色、
80 浅黄色、棕黄色及棕褐色并分别记分为0、1、2 及3 分；着色细胞所占视野的百分比以每张
切片在400 倍光学显微镜下取连续5 个高倍视野观察评分后取均值,阳性细胞率＜5%为0 分，
阳性细胞率5~25%为1 分，阳性细胞率26 ～50%为2 分，阳性细胞率51～75%为3 分，阳
性细胞率>75%为4 分。二项相乘后5 个视野相加后求平均得到最后的评分: 0～2 分为阴性
表达(-)，3～ 4 分为弱阳性(+)，5～8 分为中度阳性(+ +)，9～12 分为强阳性(+ + +)。误差控
85 制,由两位观察者分别阅片。同时，应用日本尼康公司NIS-Elements BR 2.10 图像分析软件对
平均光密度值（MOD）进行分析。
1.6 统计学分析
采用SPSS13.0 软件系统，检测数据以x ±s 表示，运用X2 检验、t 检验进行组间比较。
P＜0.05 视为有统计学差异。
90 2 结果
2.1 Lewis y 抗原在两组卵巢组织中的表达情况
Lewis y 抗原以包膜着色为主，亦有胞浆着色，Lewis y 抗原在耐药组、敏感组中的阳
性表达率分别为91.67%及60%，耐药组中的阳性表达率明显高于敏感组（0.005＜P＜0.01），
见表1 图1。
95
表1 Lewis y 抗原在两组中的表达
Table.1 the expression of Lewis y antigen in two groups
Lewis y 抗原 分组 例数
— + ++ +++
阳性例数 阳性率
耐药组
敏感组
24
30
2
12
2
7
15
11
5
0
22
18
91.67%
60.00%
100 图1 卵巢浆液性乳头状腺癌中Lewis y抗原的表达 x200（A 耐药组, B 敏感组）
Fig.1 The expression of Lewis y antigen in ovarian serous tumor x200(A drug resistance group, B drug sensitive
group )
2.2 Lewis y 抗原在两组卵巢组织中表达强度的比较
105 本次研究中，我们对40 例Lewis y 抗原表达阳性的卵巢癌组织切片进行光密度值测定
并进行独立样本t 检验分析发现，耐药组Lewis y 抗原的平均光密度值为0.2426±0.0629，
 表达强度明显高于敏感组（0.2113±0.0380）（P=0.028）见表2。
表2 Lewis y 抗原的表达强度
Table.2 the intention of 110 Lewis y antigen express
分组 Lewis y 抗原
耐药组
敏感组
0.2426±0.0629
0.2113±0.0390
2.3 Lewis y 抗原的表达与卵巢癌病理参数间的关系
在54 例卵巢浆液性囊腺癌中，Lewis y 抗原的表达与临床病理参数的关系见表3，运用
X2 检验，Fisher 确切概率计算分析显示，各期及各种分化程度患者耐药组Lewis y 阳性表达
115 率及表达强度均高于敏感组。其中晚期卵巢癌耐药组Lewis y 阳性表达率（91.3%）与表达
强度（0.2362±0.0566）均高于敏感组（75%）（0.2046±0.0158）（P 均＜0.05）；中分化患
者耐药组Lewis y 表达率（100%）及强度（0.2458±0.0597）亦高于敏感组（45%）
（0.2010±0.0207）（P 均＜0.05）；低分化患者耐药组Lewis y 阳性表达率及表达强度较敏
感组均有增高趋势，但差异没有显著性；而早期及高分化卵巢癌患者组间阳性表达率没有差
120 异性，表达强度有增高趋势。
表3 Lewis y 抗原的表达与卵巢癌病理参数间的关系
Table.3 the relationship beween the expression of Lewis y antigen and the pathology parameter of ovarian cancer
耐药组Lewis y 抗原 敏感组Lewis y 抗原
参数
例
数
阴
性
阳
性
阳性率 表达强度 例
数
阴
性
阳
性
阳性率 表达强度
FIGO 分期
I～II 期 1 1 100% 0.3126　0.0365 13 3 10 76.9% 0.2725　0.0497
III 期 23 2 21 91.3% 0.2362　0.0566 21 12 9 75.0% 0.2046　0.0158
分化程度
高分化 2 2 100% 0.2669　0.0784 5 5 100% 0.2118　0.0437
中分化 8 8 100% 0.2458　0.0597 20 11 9 45.0% 0.2010　0.0207
低分化 14 2 12 85.7% 0.2520　0.0679 8 4 4 50.0% 0.2235　0.0403
125 3 讨论
卵巢癌是目前死亡率最高的女性生殖器肿瘤，其原因与卵巢癌化疗药物耐药性直接相
关。化疗耐药机制尚不十分清楚，目前多数研究集中在多药耐药相关蛋白（MDR，药物流
出泵）的表达、DNA 损伤修复增强、谷胱甘肽依赖性解毒酶系统活性增加等方面[10],近年来，
细胞膜表面糖基抗原与肿瘤耐药之间的关系引起了人们的关注。细胞恶变过程中膜表面的糖
130 链发生明显变化，这些变化和差别与肿瘤细胞侵袭、耐药等恶性行为密切相关[11]。,
我们前期研究证明转染α1,2-岩藻糖转移酶基因的RMG-1-H 细胞Lewis y 抗原表达增加
的同时，增殖、侵袭能力增强，对5-FU、卡铂、紫杉醇等多种化疗耐药的耐药性亦明显增
强，凋亡率也明显下降[7,8]；α-L-岩藻糖甘酶[12]和抗Lewis y 抗体[9]可以部分抑制上述变化。：
与基因转染前细胞RMG-I 比较，基因转染后细胞系RMG-1-H 蛋白激酶C-a（PKC-a）、拓
135 扑异构酶I（TopoI）、多药耐药相关蛋白-1（MRP-1）及MRP-2 mRNA 的相对表达量均显
著增高，Lewis y 单克隆抗体处理后，RMG-1-H 细胞中上述耐药相关蛋白的mRNA 相对表
达量均呈时间依赖性下降[13]。我们同时证明顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP 中Lewis y
抗原的阳性表达强度显著高于亲本细胞SKOV3 [结果待发表中]。为进一步证明Lewis y 抗
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