加味桃核承气汤对Aβ损伤大鼠外周血T细
胞亚群和IL-6 的影响#
王淳*
基金项目：教育部博士点基金新教师项目（20092133120001）
作者简介：王淳，（1971-），女，副教授，血瘀证与脑部疾病. E-mail: chunwang2000@yahoo.com.cn
5 （辽宁中医药大学基础医学院，卫生生物教研室，沈阳 110032）
摘要：目的 观察加味桃核承气汤对β-淀粉样蛋白（Aβ）损伤大鼠脑外周血T 细胞亚群和
IL-6 的影响。方法 SD 大鼠36 只随机分为4 组，空白对照组（利用立体定位仪将PBS 注射
到大鼠双侧海马）、痴呆组、中药组和西药组（后三组注射Aβ1-42 全长肽）。造模7 d 后，
中药组以灌胃法（ig）给予加味桃核承气汤20 mL（20 mg• kg-1）治疗，西药组ig 给予尼
莫地平20 mL（15 mg• kg-110 ）治疗，同时空白对照组和痴呆组给予同样体积的生理盐水，1
次/d，连续21 d。采用流式细胞仪测定四组大鼠外周血CD4+T 细胞、CD8+T 细胞相对数及CD4+/CD8+
比例；用双抗体夹心ELISA 法检测血清IL-6 含量，以上指标各组间进行统计学比较。结果 与
空白对照组相比，Aβ损伤痴呆大鼠外周血CD4+T 淋巴细胞所占比例显著增高（P＜0.01），
CD8+T 淋巴细胞降低（P＜0.05），CD4+/CD8+增高（P＜0.01），IL-6 含量显著增高（P＜0.01）；
而痴呆大鼠应用加味桃核承气汤治疗后，CD4+T 淋巴细胞减少，CD4+/CD8+15 降低，IL-6 水平降低，
三组指标与痴呆组相比均存在显著差异（P＜0.05）；而且中药治疗组与应用Ca 离子阻断剂
尼莫地平西药治疗组结果相似，两者无统计学差异（P＞0.05）。结论 加味桃核承气汤能纠
正T 淋巴细胞亚群比率失调、降低血清IL-6 含量，从而发挥其抗老年性痴呆的作用。
关键词：西医结合医学；加味桃核承气汤；阿尔茨海默病；T 淋巴细胞亚群；IL-6
  0 引言
阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种慢性进行性发展的大脑退行性疾病，
是成人痴呆症中最常见的一种[1]。随着我国进入老龄化社会，该病给家庭和社会带来沉重负
担。近年研究表明，AD 的发生与免疫功能异常密切相关：AD 患者Aβ 清除机制受损，致
50 使Aβ 沉积形成免疫原，激活了脑的非特异免疫反应，如小胶质细胞过度活化，老年斑内出
现各种补体成分、急性期蛋白等炎性标记物等[2]。而这种炎症反应还可能增加血脑屏障通透
性，某些被激活的T 淋巴细胞可穿过血脑屏障进入中枢神经系统脑实质，进一步介导炎症
反应[3]。一些临床资料表明，AD 病人外周血免疫细胞存在亚型变化即抗原分化异常，患者
CD4+ T 细胞亚群显著高于正常对照组，而CD8+ T 细胞亚群水平则下降，且CD4+/CD8+比值
55 升高[4-6]。
现代药理学表明，活血化瘀方药——加味桃核承气汤具有调节机体免疫机能，提高实验
动物脾脏和胸腺指数、调节T 淋巴细胞数目的作用[7]。为此，我们尝试运用加味桃核承气汤
治疗Aβ 损伤大鼠，观察其对外周血T 细胞亚群和IL-6 的影响，为中西医结合治疗AD 提供
参考。
60 1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物
雄性SD 大鼠（中国医科大学实验动物中心提供）36 只，体重180-200 g，饲以蛋白含
量为21%的标准饲料，自由饮水，25 ℃环境饲养。
65 1.1.2 试剂
Aβ1-42（ANASPEC）；淋巴细胞分离液（北京赛驰生物技术有限公司）；荧光标记单克
隆抗体CD4-FITC，CD8-FITC（深圳市达科为生物技术公司）；IL-6 双抗体夹心ELISA 试
剂盒（深圳晶美生物工程公司）。
加味桃核承气汤（桃仁10 g，大黄6 g，桂枝6 g，甘草3 g，芒硝6 g，黄芪30 g，生地
70 15 g，麦冬12 g，玄参12 g），适量水煎，头煎20 min，二煎30 min，分别滤取药液，合并
两次药液，在60 ℃恒温条件下浓缩成每1mL 含生药1 g 的药液备用。
1.2 方法
1.2.1 造模与分组
大鼠随机分成4 组，每组9 只，分为空白对照组（利用立体定位仪将PBS 注射到大鼠
75 双侧海马）、痴呆组（注射Aβ1-42 全长肽）、中药组（注射Aβ1-42 全长肽）和西药组（注射
Aβ1-42 全长肽），具体方法见参考文献[8, 9]。在造模第7 d 后开始给药治疗，中药组ig 给予
加味桃核承气汤（给药容量为20 mL，即20 g·kg-1）、西药组ig 给予尼莫地平（给药容量为
20 mL，即15 mg·kg-1）、正常对照组和痴呆组ig 给予同等体积的生理盐水，1 次/d，连续
21 d。
80 1.2.2 大鼠外周血的制备
实验大鼠摘眼球取血，肝素抗凝，全血标本离心分离上层血浆，-70 ℃冷冻保存，分装
 备用；收集下层沉淀，用淋巴细胞分离液密度梯度离心分离单个核细胞（PBMC），用于流
式细胞仪分析。
1.2.3 T 细胞亚群分析
取分离后的85 PBMC 细胞计数，取约1×106 个细胞，稀释于1 mL PBS 中，每例标本共
做2 管，各管分别加入CD4-FITC，CD8-FITC 抗体10μL 混匀，于暗处反应30 min，PBS
洗2 遍，用流式细胞仪检测大鼠外周血淋巴细胞CD4+，CD8+细胞的百分率，同时计算
CD4+/CD8+。
1.2.4 IL-6 的检测
90 取分装、冻存保存的血清标本，冰上融化，采用双抗体夹心法ELISA 试剂盒检测血清
中IL-6 含量。
1.3 统计学方法
应用SPSS13.0 统计软件对所得数据进行统计与分析。各组数据以X ± S 表示，组间均
数比较采用方差分析检验，P＜0.05 为有统计学意义。
95 2 结果
2.1 大鼠外周血T 细胞亚群分析
与空白对照组大鼠相比，Aβ 损伤痴呆大鼠外周血CD4+ T 淋巴细胞相对比例显著增高（P
＜0.01），CD8+ T 淋巴细胞降低（P＜0.05），CD4+/CD8+增高（P＜0.01）。而痴呆大鼠应
用加味桃核承气汤治疗后，CD4+ T 淋巴细胞减少，CD4+/CD8+降低，与痴呆组相比存在显
100 著差异（P＜0.05）；且与应用Ca 离子阻断剂尼莫地平治疗结果相似，两者无统计学差异（P
＞0.05），见表1。
表1 大鼠外周血T 细胞亚群比较（ X ± S ，n=9）
Tab. 1 Comparing the numbers of T-cells of rat’ peripheral blood
组别 CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+
空白对照组 26.23±8.74 21.92±6.14 1.43±0.37
痴呆组 44.48±12.38△ 15.38±5.79▲ 2.25±0.36△
中药组 31.68±9.54★○ 19.04±5.16○ 1.85±0.42★○
注：痴呆组与空白对照组比较，△P＜0.01，▲P＜0.05；中药组与痴呆组相比较，★P＜0.05；中药组与西药组
相比，○105 P＞0.05。
2.2 大鼠外周血IL-6 的表达
与空白对照组大鼠相比，Aβ 损伤痴呆大鼠外周血IL-6 含量显著增高（P＜0.01）。痴
呆大鼠应用加味桃核承气汤治疗后，外周血中IL-6 水平降低（P＜0.05），治疗效果与尼莫
110 地平相似，两者无统计学差异（P＞0.05），见表2。
表2 大鼠外周血IL-6 表达情况（ X ± S ，ng/mL，n=9）
Tab. 2 The expression of IL-6 of rat’ peripheral blood
组别 IL-6
空白对照组 15.11±4.87
痴呆组 39.71±6.79△
中药组 19.75±5.65★○
注：痴呆组与空白对照组比较，△P＜0.01；中药组与痴呆组相比较，★P＜0.05；中药组与西药组相比，○P
＞0.05。
 115 3 讨论
阿尔茨海默病是一种以进行性记忆障碍和智能减退为主要临床特征的中枢神经系统进
行性退行性疾病，细胞外老年斑形成、细胞内神经元纤维缠结和特定脑区神经元及神经突触
丢失为其主要病理特征[1]。
传统观点认为，中枢神经系统是一个免疫赦免器官，正常情况下免疫系统的细胞和分子
120 不能自由进入脑。但是，随着研究的不断进展，人们逐渐认识到，即使在生理状态下，中枢
神经系统内也存在免疫监视过程[10]。在很多疾病，如疱疹病毒性脑炎、HIV 脑炎、多发性
硬化、阿尔茨海默氏病等在病理状态下血脑屏障结构均遭到破坏，外周免疫细胞可以主动进
入脑实质而参与炎症反应，从而启动脑内的免疫应答，清除可能会引起脑发生病变的因子。
T 淋巴细胞通过微血管内皮细胞表面相应受体，在许多黏附分子的作用下，穿过血脑屏障进
125 入脑实质[4, 5]。
AD 患者尸检结果表明，脑部海马组织和颞叶中存在CD4+ T 淋巴细胞和CD8+ T 淋巴细
胞，这可能是AD 患者Aβ 清除机制受损，致使Aβ 沉积形成免疫原，激活了脑的非特异性
免疫反应，表现为小胶质细胞过度激活和特定脑实质细胞因子水平升高，后者使AD 患者血
脑屏障通透性增强，某些被激活的T 淋巴细胞可穿过血脑屏障进入中枢神经系统脑实质[4, 5]。
130 临床病例资料又表明，绝大部分AD 患者外周血中，CD4+ T 淋巴细胞增多，CD8+ T 淋巴细
胞降低或无明显改变，但CD4+/CD8+细胞比例升高[6, 11]，由此推测可能存在中枢神经系统和
外周免疫系统之间的沟通，发生在AD 脑内的免疫异常可在外周表现出来。因此，本研究对
Aβ 损伤痴呆大鼠外周血T 细胞亚群进行分析，结果表明痴呆大鼠外周血CD4+ T 淋巴细胞
比例显著增高，CD8+ T 淋巴细胞降低，CD4+/CD8+增高与痴呆患者外周血结果一致，进一
135 步证实Aβ 清除机制受损，激活了脑内非特异性免疫反应。
AD 患者脑内活化的小胶质细胞和星形胶质细胞能表达大量炎性细胞因子，如IL-6、IFN-
γ及TGF-β等，通过细胞表面特异性受体发挥作用，造成脑内邻近细胞炎症及死亡[12]。其
中，IL-6 能促使神经元表达淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein，APP）明显增加，Aβ
蛋白沉积，诱发AD 或加速AD 的病情[13]。流行病学和临床调查发现，AD 患者的脑脊液和
140 血清IL-6 含量明显增高，且AD 患者血浆中IL-6 的升高并不是来源于AD 患者周围免疫系
统的激活而是来源于脑部[11]，这更加有力地支持了阿尔茨海默病发病的神经炎症学说。本
研究也同样对Aβ 损伤痴呆大鼠外周血IL-6 含量进行检测，结果表明痴呆大鼠外周血IL-6
含量显著增高，与以往文献结果相一致。
AD 发病可用祖国医学的痰瘀学说解释，即AD 的病机为：肾虚是本，痰浊、瘀血是标，
145 痰瘀成毒，毒损脑络，进一步加重AD 的症状[14]。为此，我们尝试应用活血化瘀方药治疗
AD 疾病。加味桃核承气汤在原方（桃仁、大黄、桂枝、芒硝、甘草）基础上加入益气养阴
成分（黄芪、生地、麦冬、玄参）[7]，使其在原有活血化瘀、泄热通下等作用之上又具益气
养阴之效，即通过清除体内“瘀毒”的作用，调节机体免疫功能，改善Aβ 损伤痴呆大鼠的
认知功能。我们应用加味桃核承气汤治疗Aβ 损伤痴呆鼠，实验结果显示：加味桃核承气汤
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