|
与I 组比较：# P﹤0.05 3 讨论 异氟烷具有良好的麻醉作用，麻醉诱导及苏醒均较快，基本以原形由呼吸道排出。咪达 160 唑仑是唯一的水溶性的苯二氮卓类镇静催眠药物，刺激性小，作用时间短、效能强，对呼吸 和循环功能抑制轻微，并且可以有效消除术中知晓。有研究显示[3]咪达唑仑可以通过苯二氮 类受体与GABAA 受体及氯离子通道等结合成GABAA-苯二氮类受体-氯通道复合物，调节 GABAA 的突触前抑制作用，从而使中枢接受的兴奋性递质进一步减少，增强了异氟烷的中 枢抑制效果。异氟烷单独或联合咪达唑仑是新生儿或婴幼儿麻醉中常用的给药模式。据文献 165 报道[4]咪达唑仑大鼠常用镇静剂量为腹腔注射1-10mg/kg，大鼠的异氟烷MAC 是1.46%[5]， 故我们采用的咪达唑仑9 mg/kg、异氟烷1.5%相当于临床麻醉或亚麻醉水平。有研究发现出 生 7d 的大鼠中枢神经系统发育与人类足月儿出生后0-6 月发育相似[2,6]，故选择7 日龄大 鼠作为研究对象可以较好模拟临床上常用全麻药及常用给药模式对脑发育高峰期婴幼儿及 新生儿大脑发育的情况。 170 随着对凋亡生化改变的认识加深以及对凋亡相关基因及凋亡途径的进一步探索，现在普 遍认为Caspase 家族与细胞凋亡的发生密切相关。Caspase 家族是一类半胱氨酸蛋白酶，具 有特异性酶切天冬氨酸氨基的位点。其中Caspase-3 是参与细胞凋亡的Caspase 级联反应的 最终反应子，在蛋白酶级联切割过程中处于核心位置，活化的Caspase-3 蛋白被认为是启动 凋亡程序的执行者[7]。因此本研究选择Caspase-3 作为研究指标，既可以从基因和蛋白水平 175 确定凋亡的存在，也可以明确凋亡的神经细胞的分布情况。 本研究采用荧光实时定量PCR 方法发现，暴露于异氟烷 6h 的P7 大鼠皮质和海马区 caspase-3 mRNA 表达升高，而暴露于异氟烷联合咪达唑仑下，P7 大鼠皮质和海马区caspase-3 mRNA 表达升高更明显；免疫组织化学法也发现，虽然各组P7 大鼠大脑在皮质、海马、丘 脑等处有Active caspase-3 表达，但暴露于异氟烷或异氟烷联合咪达唑仑后，在皮质、海马、 180 丘脑等处的Active caspase-3 表达明显增强，其中在海马、丘脑部位异氟烷联合咪达唑仑比 单纯异氟烷导致的Active caspase-3 的表达更明显。这些结果也与其他学者 [8,9,10]的研究相 符。推测可能有以下原因：① 异氟烷同时具有NMDA 受体拮抗活性和GABAA 受体激动活 性，拮抗NMDA 受体降低了细胞外谷氨酸的浓度，减少了突触形成和细胞间的连接而抑制 神经细胞；过度激活GABAA 受体则导致中枢抑制作用更强[11]；② 咪达唑仑是是苯二氮卓 185 类药物且具有GABAA 受体结合位点，与异氟烷合用进一步增强中枢抑制作用[3]。另外，有 研究[12]发现氯胺酮（一种NMDA 受体拮抗剂）触发突触发生期神经细胞凋亡早期伴随着细 胞周期蛋白D1（cyclinD1）、周期性依赖蛋白激酶4（cdk4）、Bcl-2 相互作用细胞死亡介 导因子（Bim）上调，细胞色素C 上调以及caspase-9 酶激活，之后发生的下游底物如caspase-3 的激活引起的凋亡反应；而敲除cyclinD1 基因后，明显减少Bim 及活化caspase-3 蛋白的表 190 达，减轻细胞凋亡；提示氯胺酮可能通过异常进入细胞周期诱使细胞凋亡。异氟烷也具有 NMDA 受体拮抗活性，是否同样会引起异常进入细胞周期而导致凋亡还有待进一步研究。 综上所述，异氟烷单独或联合咪达唑仑能诱导突触发生期大鼠大脑皮质、海马、丘脑 Caspase-3 表达增加，提示神经细胞凋亡可能增加，但其具体作用机制及是否具有远期影响 还有待进一步实验。 学术论文网Tag：代写论文 代写代发论文 代写职称论文 职称论文发表 |
