TRAF6 介导树突状细胞成熟的免疫学机制研究#
 

摘要：[目的]：探讨TRAF6 基因在不同成熟度树突状细胞（dendritic cells, DC）的表达及其对DC 免疫刺激活性的影响。[方法]：通过rhGM-CSF 和IL-4 体外诱导的人外周血单个核细胞来源的DC，经TNF-α、LPS、细胞因子鸡尾酒法诱导成熟，分别以流式细胞仪、ELISA、MLR 法检测DC 的表面标志、IL-12 分泌、和刺激淋巴细胞增殖能力。Real-time PCR 检测各组TRAF6 mRNA 的表达。[结果]：成熟DC 均有表达TRAF6，而高表达TRAF6 基因的DC 成熟状态最佳。TRAF6 可促进DC IL-12 的分泌，增强DC 刺激淋巴细胞增殖的能力。[结论]：TRAF6 是调节DC 激活、成熟的关键因素。
 

关键词：树突状细胞；丁酸钠；免疫耐受

0 引言
肿瘤坏死因子受体相关因子（tumor necrosis factor receptor associated factor，TRAF）是肿瘤坏死因子超家族和TOLL 样/白细胞介素-1 受体超家族重要的接头分子，在天然免疫和获得性免疫中发挥了重要的作用[1]。作为细胞质中重要接头分子，TRAF6 是TRAF 家族中唯一能与IL-1R 相关激酶、CD40 等直接结合的信号分子。上述细胞因子通过TRAF6 介导，调节下游信号通路，进而调节细胞的增殖及凋亡[2]。最近研究发现，TRAF6 是介导树突状细胞（dendritic cells, DC）成熟信号传导，促进DC 发育、激活与成熟的关键因子[3]。本实验通过观察TRAF6 在不同成熟程度DC 的表达，进一步研究TRAF6 在DC 诱导T 细胞免疫中的作用。

5 讨论
研究发现，TRAF6 对调节DC 成熟、激活与发育起关键性作用[3]。TRAF6 是TRAF 家族中唯一同时参与TNFR 与IL-1R/TLR 两个受体超家族信号传导的成员，介导不同受体传导的激活NF-κB 的信号（包括IL-1、TLRs 和CD40），成为多种信号传递与相互作用的枢纽[4]。TRAF6 具有独特的受体结合特异性，对于受体的识别与其他成员有明显的结构差异。IL-1R/TLRs 一旦与配体结合，即通过它们的共同适调子蛋白MyD88 或类MyD88 适调子蛋白Mal，经TRAF6 介导NF-κB 的激活与移位，启动信号传导途径[5]；而TNFR 超家族成员如CD40 和RANK 则直接通过TRAF6 激活NF-κB。此外，TRAF6 在IL-25R 介导的NF-κB激活与表达中起重要作用[6]。NF-κB 的激活参与DC 启动成熟过程，包括增加共刺激分子CD80、CD86表达和促进炎症因子的释放。
 

DC 作为功能最强的专职抗原递呈细胞，在调节机体免疫反应中起核心作用。成熟DC高表达MHC 抗原肽和共刺激分子，具有刺激淋巴细胞增殖和激发免疫反应的能力。我们结果显示在不同因子诱导的成熟DC 中，鸡尾酒法诱导的DC 各项成熟表型指标最佳，特别是成熟DC的特征性标志CD83，其指数达到84.87。进一步为准确定量不同成熟度DC的TRAF6的表达，我们采用Real-time PCR 了解各组TRAF6 mRNA 的表达差异。结果显示随着DC成熟度的不同，TRAF6 的表达有明显的变化。TRAF6 基因表达越强则DC 的成熟度越高。说明TRAF6 可能通过促进激活转录因子NF-κB 上调DC 表面MHC 抗原肽和共刺激分子进而诱导DC 成熟。Megas[4]发现TRAF6 基因缺失可影响细胞内NF-κB 的激活。而Kobayashi[3]研究发现TRAF6 基因缺失DC 不能上调MHC 抗原肽和CD86 分子表达，进一步证明TRAF6在上调DC表面分子方面发挥了重要的作用。
 

DC 通过摄取、加工处理和递呈抗原，诱导T 细胞分化。MLR 结果显示TRAF6 表达最高的鸡尾酒法诱导的DC 刺激T 细胞增殖的能力最强。而TRAF6 基因缺陷的DC 诱导T 细胞增殖能力减弱[3]，因为T 细胞的完全激活需要多种信号的刺激，MHC 抗原肽（第一信号）和共刺激分子CD80(第二信号)对在诱导T 细胞分化过程中发挥了重要的作用[7,8]。因此DC诱导T细胞分化能力与其表面分子的上调有密切的关系。成熟DC 通过分泌IL-12，可刺激淋巴细胞增殖。我们结果显示TRAF6 表达越高，IL-12的分泌量越大。LPS 等刺激因子通过与细胞表面TLR 结合，通过蛋白MyD88 激活IRAK 基因，TRAF6 在此过程中发挥了重要的作用。而蛋白MyD88 则是诱导DC 分泌IL-12 的重要因素[3]。并且IL-12 是诱导Th 细胞向Th1 细胞分化的关键因素[9]，可促进T 细胞增殖、分化。
 

综上所述， TRAF6 基因的表达与DC 的成熟程度有密切的关系，TRAF6 是调节DC 成熟、分化和激活的关键因素。特异性干预TRAF6 的表达，可望有效地抑制DC 的成熟。
 

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