产β-葡萄糖苷酶的菌种的筛选,鉴定及其酶学特性的研究#
摘要:本文从土样中分离筛选出一种活性较高的产β-葡萄糖苷酶的菌种WGEA1,并对其进行初步的鉴定和采用DNS 法测其粗酶液的酶学特性。酶学特性表明,WGEA1 最适生长温度是在50℃-55℃之间,最适PH 在6-7 之间;而在低于50℃条件下,WGEA1 产酶的PH 为5-8 时,酶活性较稳定,在最适反应时间30min 下,金属离子和有机溶剂都对酶活性影响很大,这些发现都将为下一步的研究酶法合成烷基糖苷奠定了基础。
关键词:β-葡萄糖苷酶;筛选;鉴定;酶学特性
0 引言
β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,EC3·2·1·21)是纤维素酶的一种,它可催化水解β-D 葡萄糖苷键,在人类、动物、植物和微生物的糖类代谢方面都具有重要的价值[1,2]。β-葡萄糖苷酶不但在纤维素降解中起重要的作用,还广泛应用于食品增香,水解白黎芦醇苷及烷基糖苷的合成等方面。
目前为止,很多学者都尝试着利用β-葡萄糖苷酶生物合成烷基糖苷[3.4],但是对于β-葡萄糖苷酶合成烷基葡萄糖苷的研究结果却还达不到工业化生产的要求,原因在于现有的β-葡萄糖苷酶的转化效率不是很高。本文就这个原因筛选新型的β-葡萄糖苷酶,并对其酶学性质进行研究,为酶法生物催化合成烷基糖苷奠定了一定的基础。
3 小结
目前已知的菌种产β-葡萄糖苷酶的酶活普遍偏低,若利用基因工程技术对这些菌种进行分子改造则耗时耗力且耗资,所以最直接有效的方法就是直接从自然界中筛选出产β-葡萄糖苷酶的酶活较高的菌种,本文是利用七叶苷平板法快速而高效的从土壤中筛选得到产β-葡萄糖苷酶的菌种WGEA1,并鉴定其为微小杆菌属。
来源不同的β-葡萄糖苷酶,在其酶学性质上存在着差异。如赵林果[9]研究的黑曲霉胞外耐高糖的β-葡萄糖苷酶,它的最适PH 为4.0,而本文筛选的酶最适PH 为6.0-7.0 之间。还有在有机溶剂的影响中,它所测得的甲醇有促进的作用,丙酮有抑制作用;而本文却与之相反,当然在其他酶学特性中也存在着其他不同的差异。所以筛选来源不同的酶,特别是有耐有机溶剂的新型的β-葡萄糖苷酶尤其重要,有助于发展非水相体系酶的生物合成和其他方面的应用,其应用前景十分乐观[10]。
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